Trypticase caldo de soja
5 ml tubos de ensaio, esterilizados e tampados
estéreis palitos de picolé de madeira
marcação Cera lápis
Tubo de ensaio cremalheira
toalhas de papel
Bleach (10 por cento solução)
Bico de Bunsen
Jogos
laço inoculação
agar soja Trypticase
placas de Petri
Incubadora imãs de geladeira
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tubos de Amostra de Solo
1 de teste são usadas para diluir as amostras de solo.
Separe um tubo de ensaio estéril arrolhado containg 5 ml de caldo nutriente tripticase soja. Escolha um palito de picolé estéril.
2 Use um palito de picolé estéril para coletar solo.
Vá lá fora e coletar uma pequena amostra de solo com a ponta do palito de picolé , utilizando uma técnica estéril , um método para garantir a amostra não está contaminada , e que o usuário não está infectado.
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Destape o tubo de ensaio e adicione o solo para o caldo de nutrientes no tubo de ensaio. Misture o solo para o caldo com o palito de picolé . Cubra o tubo de ensaio com tampa. Escreva a data e local de coleta de coleta no lado do tubo de ensaio utilizando a cera lápis de marcação .
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Coloque o tubo de ensaio em um rack tubo de ensaio por cerca de 30 minutos para permitir que o solo se depositam parte inferior.
Inoculate Petri Dish
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Desinfetar a superfície de trabalho , limpando -a com 10 por cento de solução de água sanitária e toalhas de papel .
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Desligue a placa de Petri para que a tampa inferior contendo o agar é para cima. Desenhe um T na tampa inferior , com a barra transversal do T separando fora do terço superior da tampa e do caule da T dividindo os dois terços inferiores à metade.
7 Use um bico de Bunsen a chamas ansas de inoculação .
Ligue e acender o bico de Bunsen . Chama o loop inoculação sobre o queimador de chama de Bunsen.
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Uncap o tubo de ensaio e tocar o loop para a camada superior do líquido mais claro. Retire o circuito e voltar a cobrir o tubo de ensaio.
O Método T- Streak
9 Faça um traço em zigue-zague mais de um terço do prato.
Use a barra do T que você desenhou na parte de trás da tampa do fundo como um ponto de referência. Toque a ansa de inoculação de um dos lados do espaço por cima da barra transversal T e desenhar a ponta sobre a superfície do agar em uma linha em zigue-zague , que termina a linha no lado oposto do espaço .
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Retirar a ansa de inoculação e fechar a caixa de Petri . Chama o laço no bico de Bunsen , e deixe-o esfriar por alguns instantes. Abra a placa de Petri e tocar o loop para um local próximo ao final da linha já traçada pelo loop. Fazer uma outra linha em ziguezague em ângulos rectos para a primeira linha , para o primeiro espaço por baixo da barra T e para um lado da haste .
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Remover o loop e fechar a caixa de Petri . Chama o ciclo novamente , abra a caixa de Petri , e tocar o circuito ligeiramente arrefecido a segunda linha perto de seu fim. Desenhe outra linha em ziguezague em ângulo reto com a segunda linha no espaço aberto restante na placa de Petri.
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Feche a caixa de Petri após a retirada do loop. Chama o loop e reserve. Desligue o bico de Bunsen .
Cultura Secundária
13 Selecione uma única colônia para isolar ainda mais bactérias.
Coloque a placa de petri numa incubadora a 30 graus Celsius durante 48 horas. Tirá-lo e examinar o ágar para o crescimento de colônias de bactérias . Escolha uma colônia que parece uniforme e discreto na aparência geral , uma indicação de que a colônia surgiu a partir de apenas uma única bactéria . Círculo a localização da colónia na parte de trás da tampa da parte inferior com o lápis de marcação .
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Chama a ansa de inoculação . Abra a placa de Petri e tocar a ligeiramente resfriado loop para o centro da colônia.
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Repita os passos para fazer uma T- raia em uma nova placa de petri com ágar na tampa inferior. Quando a sequência é feita e a placa de petri é fechada , escrever a data e a amostra do solo o inoculo foi feita a partir do lado inferior da tampa inferior . Desligue o bico de Bunsen .
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Incubar a placa de Petri a 30 graus Celsius por 48 horas. Examine as colônias que cresceram no ágar , à procura de uniformidade de cor, forma e textura. Repita o procedimento de cultura secundária se existem colônias que se desviam acentuadamente na aparência dos outros, o que indica que uma única bactéria não foi isolada .
17 colônias idênticas para o futuro indicam isolamento bacteriano .
Refrigerar a placa de ágar que contém colônias idênticas -aparecendo sobre ele, com a uniformidade de ser uma boa indicação de que uma única bactéria foi isolada a partir da amostra de solo .
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Realizar outros testes para identificação da bactéria isolada , se desejar , como manchas de grama, o exame microscópico e cultura em diferentes tipos de agar .
A partir de:https://jardim.98905.com/garden-lawn/soil/1009006478.html